DMEM培養基是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養基₪▩╃,是在MEM培養基的基礎上研製的↟••。
與MEM比較增加了各種成分的用量₪▩╃,同時又分為高糖型(低於4500gm/L)和低糖型(低於1000mg/L)↟••。
DMEM低糖培養基用於養幹細胞可防分化₪▩╃,DMEM高糖可養大多數哺乳動物的細胞↟••。
注意事項☁☁:
1☁✘╃☁、培養及長期放置₪▩╃,需要2-8℃避光儲存₪▩╃,請勿低溫凍存↟••。
2☁✘╃☁、培養基中新增的L-谷氨醯胺在溶液中不穩定☁✘╃☁、易分解₪▩╃,長期放置後使用若發現細胞生長變慢可以在使用前加入適量的L-谷氨醯胺₪▩╃,來維持細胞正常代謝↟••。
3☁✘╃☁、含有NaHCO3的培養基開瓶次數較多後培養基內的CO2會逐漸溢位₪▩╃,PH值上升₪▩╃,培養基的顏色會偏紫色↟••。
培養基偏鹼性會造成細胞生長停滯或死亡₪▩╃,建議分裝成小瓶使用或用HEPES調整至正常PH範圍↟••。
使用步驟☁☁:
1☁✘╃☁、準確稱量試劑☁☁:根據不同菌類的用途₪▩╃,選擇適宜的培養基₪▩╃,培養基所需試劑必須純淨↟••。
2☁✘╃☁、校正PH值☁☁:將稱量好的培養基各種成分放入容器內₪▩╃,標記劃線☁✘╃☁、加熱溶解☁✘╃☁、補充水分☁✘╃☁、測定酸鹼度₪▩╃,常用PH6.8-8.0的精密試紙或酸度計測定↟••。
用1NNaOH和1NHCI調節PH值到適宜範圍內↟••。
3☁✘╃☁、過濾☁☁:將玻璃漏斗置鐵架上₪▩╃,再用DMEM低糖紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中₪▩╃,將上述培養基倒入其中過濾至透明↟••。
4☁✘╃☁、分裝☁☁:將過濾後的培養基分裝於中試管或三角瓶內₪▩╃,塞好棉塞用牛皮紙包紮好₪▩╃,準備滅菌↟••。
5☁✘╃☁、滅菌☁☁:培養基的滅菌₪▩╃,常用高壓蒸汽滅菌法↟••。
一般微生物的營養細胞在水中煮沸後即被殺死₪▩╃,但細菌的芽孢有較強的抗熱性₪▩╃,需經高壓蒸氣滅菌才能達到滅菌的目的↟••。
根據蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理₪▩╃,即壓力越大₪▩╃,蒸汽溫度就越高↟••。
因此₪▩╃,在同一溫度條件下₪▩╃,採用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好↟••。
而在溼熱情況下₪▩╃,菌體吸收水分後₪▩╃,其蛋白質易於凝固變性₪▩╃,因為蒸汽的穿透力強₪▩╃,殺菌效果好↟••。
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